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色譜柱使用的一般注意事項

更新時間:2023-08-15      點擊次數(shù):1047
 
 1. 色譜柱各部分名稱


 2. 色譜柱的安裝

(1) 安裝色譜柱前請先將設備中的流路充分洗凈,置換成流動相。另外,請切換閥清洗并置換進樣器的流路(進樣環(huán))。置換不互溶或溶解性低的溶劑時,先使置換為雙方溶劑都能互溶的溶劑,再置換成使用溶劑。
(例1)從氯仿置換成水的時候,先置換為甲醇,再置換成水。
(例2)從高濃度緩沖溶液(或鹽的水溶液)置換成水/乙腈的時候,先置換為水,再置換成水/乙腈。
 

注意 色譜柱不能使用的溶劑在流路中殘留可能會造成色譜柱的劣化。
注意 流動相組成發(fā)生顯著變化,可能造成泵、管路中的污垢脫落,可能會造成色譜柱的劣化。
(2) 查看色譜柱身標簽,然后將色譜柱連接到設備,使流動相沿流動方向(?)流動。 使用保護柱時,請依次先連接保護柱,再連接分析柱。
(3) 請一邊按住管路一邊擰緊色譜柱的末端接頭,防止管路和末端接頭中產(chǎn)生空隙。空隙會造成樣品的擴散,導致色譜峰變寬。
(4) 將流速設置為小于正常流速的一半,然后開始送液。 在升溫使用色譜柱時,以低流送液直到達到設定溫度,然后逐漸將流速增加到所需流速。
 
警告 請檢查溶劑是否泄露。否則可能會造成漏電、腐蝕或化學損壞。
注意 色譜柱連接入設備時,請注意不要使氣泡進入色譜柱,否則可能造成色譜柱劣化。
注意 當連接色譜柱或從停止送液的狀態(tài)開始送液時,以小于正常流速一半的流速送液,壓力突然升高可能會使色譜柱劣化。
注意 升溫使用色譜柱后,將流速降低至正常流速的一半以下并繼續(xù)送液,柱溫恢復至室溫,然后停泵。 否則洗脫液冷卻時發(fā)生收縮,在色譜柱內形成空隙可能導致色譜柱劣化。

3. 樣品配制

(1) 盡量使用流動相溶解和稀釋樣品。 如果難以溶解在流動相中,請盡量和流動相組成接近。 對于梯度洗脫,建議使用初始流動相配制樣品。
(2) 為了防止由于顆粒物(不溶物)的堵塞導致色譜柱變差,劣化或性能變差,請使用濾膜(0.45μm)過濾樣品。
(3) 為了保護分析柱,建議使用保護柱。
 

參考 保護柱可保持分析柱的性能,并沒有提高分離性能的作用。

4. 流動相配制

(1) 流動相請充分脫氣防止有氣泡。
(2) 流動相中含有不溶的雜質可能會導致色譜柱性能下降和色譜圖噪聲,因此請使用濾膜(0.45μm)過濾流動相。
(3) 確認色譜柱的儲存溶劑,不互溶或溶解性低的溶劑時,先置換成雙方溶都能互溶的溶,再置成使用溶。
(4) 置換流動相時,請使用通常流速一半以下的流速送液。
(5) 進行梯度洗脫時,由于流動相組成的變化,色譜柱壓力可能會超過梯度洗脫過程中的最大使用壓力。 請調整流速和色譜柱溫度,以免超出最大使用壓力。
 

注意 使用水時,請使用超純水裝置新配制的水或者剛開封的HPLC級蒸餾水。使用有機溶劑時,請使用HPLC級以上的試劑,開封長時間的有機溶劑可能有性質改變、吸濕、污染的問題,請不要使用。
注意 請勿使用已長時間保存的流動相,組成的變化可能導致洗脫行為的變化和色譜柱的劣化。
注意 如果使用腐蝕性較強的鹽(例如氯化鈉),請在分析后將其洗凈,以免鹽殘留在設備或色譜柱上,設備和色譜柱可能會生銹。
參考 建議使用在線脫氣機。
參考 請設置泵的報警壓力,以避免超過最大可用壓力。

5. 色譜柱清洗方法

流路或者樣品中有不溶物質或者吸附性物質殘留在色譜柱內,可能會影響色譜柱的洗脫及壓力的變化,這種情況清洗色譜柱可能有改善效果。使用保護柱時,請先去除保護柱進行檢測,如果效果改善了,則可能是保護柱的原因,請清洗保護柱。
如果去除了保護柱仍然沒有改善,請分別清洗保護柱和分析柱,請注意把保護柱和分析柱分開清洗。清洗色譜柱時,請不要連接檢測器,流動相從色譜柱流出后直接流入廢液缸即可。

(1) 如果不溶物堵在色譜柱入口,可以逆接色譜柱并以小于正常流速一半的流速通流動相來將其除去。
(2) 其他的清洗方法請參考各產(chǎn)品的使用說明書。
 
6. 色譜柱的保存

置換成出廠時的儲存溶劑,從裝置中卸下色譜柱并擰緊兩端堵頭,在溫度變化小的陰暗處儲存。
 

注意 色譜柱內絕對不能干燥,否則可能導致色譜柱劣化。

7. 色譜柱的檢定方法

檢定條件請參考各產(chǎn)品包裝盒中的出廠報告(Certificate of Analysis)。理論塔板數(shù)(N)和不對稱系數(shù)(Fas)請通過如下方法計算。
 


 
8. 色譜柱的廢棄方法

通常實驗中使用的色譜柱應根據(jù)當?shù)卣囊?guī)定,作為工業(yè)廢棄物進行處置。
 
9. 其它注意事項

(1) 請勿擰開色譜柱的末端螺絲。
(2) 請勿對色譜柱施加敲擊,掉落等強烈沖擊。

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